本書介紹了常用的分子生物學和基因工程實驗技術(shù)。全書分為三部分,第一部分為基礎性實驗,介紹了一些簡明且獨立的實驗方案,每個實驗可在半日內(nèi)完成,且成功率高,因此特別適用于有關(guān)專業(yè)的本科實驗教學;第二部分為綜合性實驗,實驗略微復雜,適用于有一定基礎的高年級本科生實驗教學;最后一部分為研究型實驗,為培養(yǎng)學生的獨立科研工作能力提供了更加貼近科研工作的實驗方案
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《分子生物學及基因工程實驗教程(第三版)》:
第一部分 基礎性實驗
實驗1 質(zhì)粒的分離——堿裂解法
【實驗目的】
1.學習堿法分離質(zhì)粒的基本原理。
2.掌握堿法分離質(zhì)粒的操作方法。
【實驗原理】
質(zhì)粒是染色體之外裸露的、具有自主復制能力的、以超螺旋狀態(tài)存在于細胞內(nèi)的雙鏈DNA 分子。質(zhì)粒的分離是分子生物學研究中最基本的技術(shù),目前提取質(zhì)粒的方法很多,比如CsCl梯度離心法、煮沸法、硅石粉法、堿裂解法等。本實驗所用的堿裂解法是一種經(jīng)典的分離質(zhì)粒DNA 的方法,其基本原理是利用染色體DNA 與質(zhì)粒DNA 在變性程度和復性速度的差異,即在pH>12的堿性條件下,大腸桿菌的基因組DNA 氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性,但在該條件下,質(zhì)粒因其具有共價閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)的特點,兩條互補鏈間的氫鍵沒有完全被破壞,兩條鏈仍然部分地結(jié)合在一起;當溶液的pH 回復至中性時,質(zhì)粒DNA 快速復性,但是染色體DNA 由于分子很大,難以復性;在高鹽