目錄
第三版前言
第一章 細胞生物學研究方法概述 1
第一節(jié) 細胞制片方法 1
第二節(jié) 細胞化學技術 3
第三節(jié) 細胞獲取與分離方法 4
第四節(jié) 細胞工程技術 7
第五節(jié) 基因編輯技術 14
第六節(jié) 單細胞測序技術 15
第七節(jié) 細胞代謝組學分析方法 16
第八節(jié) 細胞能量代謝分析 18
第九節(jié) 活細胞成像技術 21
第二章 細胞生物學諾貝爾獎研究發(fā)現(xiàn)之旅 23
第一節(jié) 細胞感知和適應氧變化機制發(fā)現(xiàn)之旅 23
第二節(jié) T細胞表面的免疫負調節(jié)分子發(fā)現(xiàn)之旅 24
第三節(jié) 細胞自噬機制發(fā)現(xiàn)之旅 26
第四節(jié) 構成大腦定位系統(tǒng)的細胞發(fā)現(xiàn)之旅 27
第五節(jié) 細胞囊泡運輸系統(tǒng)及其調控機制發(fā)現(xiàn)之旅 29
第六節(jié) 細胞重編程及誘導性多能干細胞發(fā)現(xiàn)之旅 31
第七節(jié) 染色體端粒及端粒酶對染色體的保護機制發(fā)現(xiàn)之旅 32
第八節(jié) 器官發(fā)育和程序性細胞死亡的基因調節(jié)發(fā)現(xiàn)之旅 33
第九節(jié) 蛋白質地址簽的發(fā)現(xiàn)之旅 35
第十節(jié) G蛋白及其在細胞中的信號轉導作用發(fā)現(xiàn)之旅 36
第十一節(jié) 蛋白質可逆磷酸化作用的生物調節(jié)機制發(fā)現(xiàn)之旅 37
第三章 細胞生物學先進儀器設備 39
第一節(jié) 細胞觀察及形態(tài)分析設備 39
第二節(jié) 細胞分選設備 52
第三節(jié) 細胞制片設備 57
第四節(jié) 細胞破碎設備 60
第五節(jié) 細胞活力檢測設備 62
第四章 基礎性實驗 66
第一節(jié) 細胞制片及染色觀察 66
實驗1 血細胞涂片的制備及染色觀察 66
實驗2 植物葉片組織徒手切片的制備及觀察 68
實驗3 動物組織冰凍切片的制備及染色觀察 69
第二節(jié) 細胞獲取與分離 70
實驗4 研磨低滲法分離小鼠脾臟單個核細胞 70
實驗5 酶解法制備植物原生質體 72
實驗6 密度梯度離心法分離外周血單個核細胞 74
實驗7 小鼠腹腔巨噬細胞的富集與分離 75
第三節(jié) 細胞器和細胞組分顯示 76
實驗8 植物細胞線粒體和液泡的超活染色及觀察 76
實驗9 酸性磷酸酶法顯示巨噬細胞溶酶體 78
實驗10 牛蛙胸骨劍突軟骨細胞高爾基體的中性紅染色 79
實驗11 細胞中過氧化物酶體的顯示 80
實驗12 細胞中多糖和游離脂的顯示 82
實驗13 經典細胞化學法顯示細胞DNA和RNA 83
實驗14 考馬斯亮藍染色法顯示細胞骨架 85
第四節(jié) 細胞大小測量與細胞計數(shù) 88
實驗15 細胞大小的顯微測量 88
實驗16 細胞計數(shù) 89
第五節(jié) 細胞生理 91
實驗17 哺乳動物紅細胞膜的通透性檢測 91
實驗18 植物細胞質壁分離現(xiàn)象觀察及質壁分離法測定基態(tài)滲透勢 93
實驗19 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬現(xiàn)象觀察及吞噬活性檢測 94
實驗20 細胞運動觀察實驗 96
實驗21 臺盼藍染色法鑒別死活細胞 98
第六節(jié) 細胞分裂 99
實驗22 壓片法制備植物細胞分裂標本及顯微觀察 99
實驗23 花粉母細胞減數(shù)分裂標本制備 101
實驗24 滴片法制備懸浮細胞分裂標本 102
實驗25 去壁低滲法制備植物細胞染色體分散標本 105
第七節(jié) 細胞裂解及效果檢測 106
實驗26 小鼠腹水瘤細胞裂解及乳酸脫氫酶活性檢測 107
第八節(jié) 細胞器分離 108
實驗27 植物細胞葉綠體的分離 109
實驗28 動物細胞線粒體的分離 110
實驗29 胞外囊泡提取 112
第五章 綜合性實驗 115
第一節(jié) 細胞分選 115
實驗30 免疫磁珠分選法分離小鼠脾臟CD4+T淋巴細胞 115
實驗31 T細胞的免疫熒光標記及流式細胞儀分選實驗 117
第二節(jié) 細胞培養(yǎng)與細胞融合 119
實驗32 貼壁細胞的原代培養(yǎng)實驗 120
實驗33 貼壁細胞的傳代培養(yǎng)實驗 122
實驗34 小鼠骨髓單個核細胞集落形成實驗 124
實驗35 PEG介導的細胞融合實驗 125
第三節(jié) 細胞凍存與復蘇 127
實驗36 細胞凍存與解凍復蘇實驗 128
第四節(jié) 細胞增殖與活力檢測 130
實驗37 MTT比色法檢測細胞增殖與活力 131
實驗38 CCK8法檢測細胞增殖與活力 132
實驗39 ATP生物熒光法檢測羥基喜樹堿對腹水瘤細胞活力的影響 134
第五節(jié) 免疫細胞化學 136
實驗40 免疫熒光法顯示細胞骨架 136
實驗41 酶免疫細胞化學法顯示小鼠脾臟淋巴細胞 138
第六節(jié) 細胞黏附與遷移分析實驗 140
實驗42 腫瘤細胞黏附能力分析實驗 140
實驗43 檢測腫瘤細胞侵襲能力的Transwell小室實驗 142
實驗44 腫瘤細胞遷移的劃痕實驗 143
第七節(jié) 細胞的激活及信號轉導分子檢測 145
實驗45 利用鈣離子熒光探針檢測細胞內Ca2+濃度 145
實驗46 信號蛋白磷酸化水平檢測實驗 147
實驗47 轉錄因子NF-κB活性檢測實驗 149
第八節(jié) 哺乳動物細胞轉基因及表達檢測 151
實驗48 綠色熒光蛋白基因轉染體外培養(yǎng)的小鼠成纖維細胞及表達檢測 152
第九節(jié) 細胞周期調控與檢測 154
實驗49 利用流式細胞術分析細胞周期時相 155
實驗50 細胞周期蛋白D1基因轉染細胞及細胞周期檢測 157
實驗51 胸腺嘧啶脫氧核苷（TdR）雙阻斷法同步化培養(yǎng)的動物細胞 159
實驗52 秋水仙胺阻抑法分離貼壁培養(yǎng)的哺乳動物M期細胞 160
實驗53 植物細胞中期同步化誘導 161
第十節(jié) 分裂細胞微核的誘導與檢測（細胞遺傳毒性） 162
實驗54 蠶豆根尖細胞微核的誘導與檢測 163
實驗55 小鼠骨髓多染性紅細胞的誘導與檢測 164
實驗56 小鼠精巢細胞微核的誘導與檢測 166
第六章 探究性實驗 169
第一節(jié) 腫瘤細胞誘導凋亡及檢測 169
實驗57 涂片染色法檢測凋亡細胞 169
實驗58 利用激光共聚焦顯微鏡及流式細胞儀檢測Annexin V-FITC/PI染色的凋亡細胞 171
實驗59 凋亡細胞DNA的梯狀條帶電泳 172
實驗60 TUNEL技術原位檢測顯示凋亡實體瘤細胞 175
第二節(jié) 細胞自噬的誘導及檢測 177
實驗61 MDC染色法檢測饑餓法誘導自噬的巨噬細胞 178
實驗62 GFP-LC3基因轉染法顯示無血清饑餓法誘導形成的自噬體 180
第三節(jié) 細胞衰老的誘導與檢測 181
實驗63 H2O2誘導細胞衰老及胞內衰老相關的β-半乳糖苷酶檢測 182
實驗64 衰老細胞ROS的流式細胞儀檢測 183
第四節(jié) 細胞分化的誘導及檢測 185
實驗65 骨髓造血干細胞的誘導分化實驗 187
實驗66 維甲酸誘導腫瘤細胞分化及檢測實驗 189
第五節(jié) 基因沉默與編輯 191
實驗67 RNA干擾沉默綠色熒光蛋白基因 193
實驗68 CRISPR-Cas9技術定向敲除哺乳動物細胞基因 194
第六節(jié) 細胞端粒酶活性檢測實驗 198
實驗69 腫瘤細胞的端粒酶活性檢測 199
附錄 202
附錄一 常用溶液配制方法 202
附錄二 腹水瘤小鼠模型建立方法 203
附錄三 細胞培養(yǎng)前的準備工作 204
附錄四 細胞生物學實驗教學方法案例 206